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血液中血球之分离
目的 「分类」为人类认识大自然生物最基本的法则,想要瞭解人体生命运作的奥秘,必须先对细胞做型态及功能上的做分类,这些看似简单的想法,却是往后探究生命活动的基础。此实验是以血液这个「溷合物」为例子,利用离心的方法分离出各种成分并进一步观察血球细胞。
原理 血液像河流一样,主要是水分,就是血液中液体的部分,称之为血浆(Plasma)。在这流动的液体中也有一些浮游生物,就是红血球(Red blood Cells)、白血球 (White blood cells)、和血小板(Platelets)等,它们大小不一,形状不同,数量也不同。体积以白血球最大、红血球次之、血小板最小;数量以红血球最多;白血球有核行动有自主性。由于血液细胞依不同种类都有其特定的密度,如:红血球还有大量的血红素,而血红素中又含有铁,因此在血球细胞中其密度最大,因此利用不同溶液的密度,使细胞在离心的过程中,会分佈在与其密度相同的溶液介面。粒子在离心时,其 分子量、分子密度、组成、形状 等,均会影响其沉降速率,沉降係数即用来描述此沉降性质;其单位为 S (Svedberg unit),每一种粒子的沉降係数与其分子密度或分子量成正比。 不同沉降係数的粒子可利用离心法在密度梯度中作分离。
材料 血液(5ml):前一天预先抽出,以heparin防止凝血,为各种血球细胞的来源。
设备 悬臂式离心机 (直径10cm)
离心管
玻片
药品 Ficoll-Paque溶液
食盐水:低张,等张(约0.4%),及高张溶液
步骤 1. 10ml离心管内加入5mlFicoll-Paque溶液,再缓慢的将5ml血液加入离心管。(注意!两者不能溷合。)
2. 在18℃下,以3000rpm的离心速度,离心30分钟。
3. 离心后,离心管内会分成不同的溶液层。记下所见到的分层
4. 将各层作成玻片标本观察,看各种血球的型态。
5. 吸取红血球那一层溶液,分别以低张,等张及高张溶液稀释十倍后滴一滴在载玻片上,盖上盖玻片,以400X观察红血球的型态,讨论渗透压对于细胞的影响。
时间 约一个半小时
备注
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