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本文标题："蛋白质的抽提, 纯化与计量?"

蛋白质的抽提, 纯化与计量

测蛋白质之量：

Bradford法：

利用染剂Coomassie Brilliant Blue会与蛋白质结合的性质, 再与已知蛋白质浓度之标准曲线比较, 而估计蛋白质之量.

材料：

0.5mg/ml bovine serum albumin（BSA）

0.15M NaCl

Coomassie Brilliant Blue 液

实验步骤：

1. 在4支微量管中, 分别放入0.5mg/ml BSA液5, 10, 15, 20μl再以0.15M NaCl液加入使达总体积100μl再以1支微量管加入100μl之0.15M NaCl, 此为控制组.

2. 在每试管中加入1ml之Coomassie Brilliant Blue液, 并充分溷合, 置室温2分钟.

3. 以光谱仪测A595, 订出标准曲线, 再测未知浓度液, 已查出其浓度. 但若未知液浓度太大, 可稀释后再测.

附注：

1. Coomassie Brilliant Blue液製法：以一个1公升的锥形瓶, 溶解100mg之Coomassie Brilliant Blue G-250于50ml之95﹪酒精中, 再加100ml的85﹪phosphoric acid液, 再加入dH2O使达1,000ml, 再以滤纸过滤, 并保存在4℃中备用.

2. 甘油, 洗洁精, 2-mercaptoethanol, acetic acid, ammonium sulfate, Tris等均会影响测定结果.