关于原生质体
* 渗透压的关键:原生质体是一个具有细胞膜,但不具细胞壁的植物细胞。由于原生质体没有细胞壁,故其对渗透压的改变是非常敏感的,而且必须储存在一个等渗的溶液,来防止其破裂。高渗的溶液将导致原生质体缩小。
* 原生质体的外观:原生质体是呈圆球形的,明显的三度空间结构且独立地漂浮在溶液内。叶绿体可能被液泡推向相反的一个小区域(液泡膜无法显微镜下见)。原生质体的大小一般而言是一致的。但不同的组织来源及不同的渗透压溶液可能会导致原生质体的大小不一。比较原生质体的大小和未处理的叶子单位面积的细胞大小。
* 组织来源:各种植物组织可提供产生原生质体的细胞。这个方法已成功地应用在茄科植物(Solanaceous)(马铃薯和蕃茄的家族)的叶肉细胞上。原生质体也可以悬浮培养的方法来分离(单一细胞悬浮在溶液中成长)。亦有癒合组织培养(癒合组织是未分化的组织),胚囊、根和幼苗的培养。具有薄的表皮组织最适合做为原生质体製备的材料。
* 可能的延伸:将原生质体放在不同(已知的)渗透压溶液中,学生可稀释缓冲溶液(0.625M)来获得一个细胞可容忍的渗透溶液。
a.尝试去决定原生质体可能的直径(diameter)范围。
b.尝试去决定原生质体内的渗透压浓度。
c.比较在相同的渗透压溶液下,原生质体和植物细胞的不同。
为什么这实验要提出植物可容忍不同渗透压和其脱水的能力?请比较植物和动物之间容忍各种渗透压和脱水的情形。比较陆生植物或水生植物和动物间细胞内水分调节的不同适应情形。
接下来是原生质体的灭菌工作:全部的步骤都要用灭菌的设备。关于灭菌的设备及叶片的表面灭菌指导可显微镜下surface sterilization of biological materials。接着下面的步骤。
1.用灭菌过的棉布【注:尼龙网较好用】,过滤原生质体及叶片的悬浮液至50ml圆锥形离心管。先用5~10ml灭菌过的mannitol(不加酵素),润湿培养盘,并同样地润湿棉布过滤器。然后过滤原生质体到离心管。
2.小心地离心(75Xg,2min),用灭菌过的pipette吸取原生质体悬浮液。
比较四个界之间的细胞壁(全部的细胞都有细胞膜):
动物:无细胞壁;细菌:细胞壁有连结性的蛋白质和多醣类;酵母菌(菌类):为具多醣类及几丁质的细胞壁;植物:具纤维素的细胞壁(多醣类)包埋在其他多醣类和蛋白质的基质中。细胞壁的厚度随着植物细胞的年龄和不同组织而不同。
预防措施:
1.假如你只要观察原生质体,那么精细的灭菌设备是不需要的,这个步骤可以不必使用酒精。
2.利用原生质体做转殖的准备,则需要无菌设备的使用。即需要酒精和火的使用。
3.酒精是易燃的,要小心地使用。