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本文标题："老师对于原生质实验材料前准备的指导"
老师对于原生质实验材料前准备的指导：
准备时间：一小时
缓冲溶液的配製(0.625M的mannitol，500ml)
【注：藻类则为0.84M】
1.先在200ml的蒸馏水加入56.94g的mannitol，使其溶解后，再加蒸馏水直到总体积为500ml。
2.每一组先取10ml 的溶液到试管或烧杯中，或在实验期间提供每一组学生取10ml的总量。
Notes：
1.甘露醣醇（mannitol）是一种六碳醣类之醣醇，帮助维持原生质体的等张渗透压（isotonic），其百分比浓度约为12~14﹪。
2.以上所配製的mannitol溶液其pH值约为4~5，若将mannitol的pH值调为6~7时，将可获得更多的原生质体。（一滴0.1N的NaOH应足够调整50ml溶液的pH值）。
3.0.625M的蔗糖溶液可和烟草叶作用的很好，也可和Elodea及波菜叶作用。但蔗糖会被细胞代谢，所以在培养期间，其浓度会降低，而影响渗透压缓冲的能力。
4.若製备原生质体的目的，是要来做电破法或其他的转殖技术的，则用0.6M的mannitol，25mM的MES缓冲溶液。也就是加54.66g的mannitol和2.44g的MES 到200ml的蒸馏水中，用1.0N的NaOH（约每50ml，15滴）调整pH值到5.7，然后加水至500ml，灭菌。
5.MES是一种酸硷缓冲物质（用来维持蛋白质活性）。
酵素：软化酵素（macerase）和纤维酵素（cellulysin）
* 用称药纸称0.1g软化酵素和0.2g纤维酵素，放入每组的试管中或烧杯中。P.S这两种酵素可以溷合在一起。
* 在用之前立刻加酵素到10ml的缓冲溶液内----酵素的浓度为1﹪软化酵素和2﹪纤维酵素。
Note：
1.在用之前，立刻将酵素加入缓冲溶液中，因这些酵素长时间在高温下会不稳定。如果是在无菌台中操作下，可先用一个注射针筒，装新鲜配好的酵素，用0.45μ的薄膜过滤消毒之。
2.Macerase (软化酵素)是Sigma公司的专有名称，也就是粗果胶酵素(crude pectinase)，是Rhizopus真菌萃取而来的。果胶酵素可将细胞与细胞之间软化而分开。
3.Cellulysin是Sigma公司的专有名称，也就是纤维酵素（cellulase），是从Trichoderma uride 分离而来的，此种酵素可溶解细胞壁的纤维素。
老师对于实验大纲的陈述：（略）
下列的大纲将用转殖的问题来当做活动的内容。
1.介绍转殖的概念（外来DNA进入细胞的介绍）。讨论为什么人要转殖细胞的理由。（引入新的基因，而使新的性状进入细胞或生物体内）。
2.要求学生描述细胞的屏障（如细胞膜、细胞壁）。讨论藉由这些屏障而能维持在细胞内的物质（如水、溶质、胞器、DNA）和思考如果这些物质没有在细胞内，细胞的命运将如何。讨论为什么细胞可维持DNA在细胞内（膜可维持DNA在内，将可能同样地会不让DNA进入；假如病毒的DNA或RNA进入细胞内，通常会破坏细胞）。
3.引导学生思考出不伤害细胞的转殖方法。并请学生详述每个步骤的证明方法。
4.由学生来製备原生质体，并回答分析问题。
5.学生複习他们所提出的转殖方法，并讨论决定何者会成功。
外加的资讯：