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本文标题："微生物学实验-继代细胞培养（Vero cell）"

微生物学实验-继代细胞培养（Vero cell）

1. 观察25 cm2细胞培养瓶底部细胞已长满且培养液清澈无细菌污染之状态。

2. 倒掉原有的培养液，以磷酸缓冲溶液（pH 7.2-7.4）清洗2～3次。

3. 加入约3 ml之0.05% Trypsin/EDTA消化液至T-25角瓶内，将细胞充分覆盖并

停留15-30秒。

4. 倒掉Trypsin/EDTA，置于37℃培养箱感作约1分钟。

5. 以显微镜观察细胞形态，若出现圆形化后轻拍细胞培养瓶底部，使细胞脱

离培养瓶底部表面。

4. 加入10 ml新的培养液，以塑胶吸管连接pipetman反覆吸放冲刷细胞培养角

瓶内之细胞液，直到显微镜下未见大的细胞团块为止。

5. 以血球计算板计算细胞数，额外加入新的培养液，调整成5-10×104 cells/m

之细胞悬浮液。

6. 取新的25 cm2培养瓶上写明细胞名称，继代数目、日期及细胞数目。

7. 将每培养瓶加入5 ml细胞悬浮液，旋开瓶盖一圈。

8. 置入5% CO2 培养箱中于37℃下过夜培养。

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结果

1. 将细胞培养瓶自 5% CO2 培养箱取出后栓紧瓶盖，以肉眼观察培养液的颜色、

瓶底细胞生长覆盖之情形。

2. 于倒立显微镜下观察并以绘图方式纪录细胞之型态与生长情形。

六、问题与讨论

1. 株化细胞为何能以人工方法作不限次数之继代培养而初代细胞不行？

2. 为何细胞培养液需额外添加胎牛血清？