显微镜下人工的方法培养细胞以进行病毒的接种
一、目的
显微镜下人工的方法培养细胞以进行病毒的接种
以人工的方法培养细胞以进行病毒的接种或增殖之用
二、原理
病毒不若细菌可以在人造之培养基上增殖,必须依赖活体细胞来製造病毒所
需之蛋白质、酵素等,因此为达到增殖病毒之目的,必须先培养细胞,而人工培
养细胞又可分成初代细胞培养以及株化细胞之继代培养,前者所取之材料为动物
内脏、组织或胚胎,后者则为已癌化之细胞株,依病毒增殖之喜好选择初代细胞
或株化细胞培养。
三、材料与设备
(一) 材料
1. 培养基(minimum essential medium; MEM)
2. 胎牛血清 (fetal calf serum; FCS)
3. 磷酸缓冲溶液(PBS; pH 7.2-7.4)
4. Vero 细胞株
5. 25 cm2 细胞培养瓶 (culture flask)
6. Dulbecco's PBS
7. citosol 麻醉剂
8. RPMI-1640 细胞培养液
9. penicillin 及 streptomycin
10. Trypan blue 染剂
11. 24 孔平板培养皿
(二) 设备
1. 无菌操作台
2. 倒立显微镜
3. 微量吸管(pipetman)
4. 塑胶吸管(1、5、10、20 ml)
5. 血球计算板
6. 真空帮浦
7. 二氧化碳培养箱